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ALAT ANTIGEN RAPID: Connaissance de base de la détection d'acide nucléique - Partie 1

Nombre Parcourir:0     auteur:Éditeur du site     publier Temps: 2022-04-03      origine:Propulsé

ALAT ANTIGEN RAPID: Connaissance de base de la détection d'acide nucléique - Partie 1

ALAT ANTIGEN RAPID: Connaissance de base de la détection d'acide nucléique

1. Quelle est la détection d'acide nucléique

Définition de l'acide nucléique: l'acide nucléique est une sorte de macromolécules biologiques reliées par des nucléotides ou des désoxynucléotides à travers une liaison diester de 3 ', 5' - phosphate.

L'acide nucléique présente des fonctions biologiques très importantes, stockant principalement et transmettant des informations génétiques.

2. Classification des acides nucléiques

Les macromolécules d'acide nucléique peuvent être divisées en deux catégories: acide désoxyribonucléique (ADN) et acide ribonucléique (ARN).

3. Composition de l'acide nucléique

L'ADN et l'ARN sont formés en reliant la tête et la queue d'un nucléotide, composé de cinq éléments: C, H, O, N et P.DNA sont le matériau génétique de la plupart des organismes. L'ARN est un matériau génétique de quelques virus sans ADN, tels que le VIH, la grippe, le virus du SRAS, etc.La la longueur moyenne de l'ARN est d'environ 2000 nucléotides, tandis que l'ADN humain est très long, environ 3x10 ^ 9 nucléotides.

4. Fonction de l'acide nucléique

Il joue un rôle dans le stockage et la transmission d'informations génétiques dans la réplication des protéines et la synthèse. L'acide nucléique n'est pas seulement le matériau génétique de base, mais joue également un rôle important dans la biosynthèse des protéines. Par conséquent, il joue un rôle décisif dans une série de phénomènes de vie importants tels que la croissance, l'hérédité et la variation.

L'ADN et l'ARN sont des acides nucléiques. Quelles sont les différences dans leur composition chimique comme suit:

5. Méthode de test

La méthode de détection d'acide nucléique détecte principalement l'acide nucléique cible dans l'échantillon en amplifiant simultanément l'acide nucléique cible et en générant le signal détectable.Il peut être appliqué à la détection d'acide nucléique en microbiologie clinique, au dépistage sanguin, au diagnostic des maladies génétiques et à la prévention, à la médecine légale et à la prévention. Autres domaines.

À l'heure actuelle, les principales méthodes utilisées sont les suivantes:APA d'antigène à test rapide APA UIT à vendre - Udxbio

une. Séquence d'acide nucléique Ampplication dépendante de la séquence

NASBA est une nouvelle technique d'amplification isothermique d'ARN médiée par une paire d'amorces, qui est une séquence de nucléotides continue et uniforme et spécifique in vitro.La réaction a été réalisée à 42 ° C et la gabarit d'ARN pourrait être amplifié environ 109 fois en 2. Heures.Le principe de NASBA est d'extraire l'ARN viral, ajoutez la transcriptase inverse AMV, la RNase H, la T7RNA polymérase et les amorces pour l'amplification. La réaction entière est divisée en phase non cyclique et en phase cyclique: dans la phase non cyclique, amorcer i et modèle L'ARN est recuit pour synthétiser l'ADNc sous l'action de la transcriptase inverse AMV pour former l'ARN: l'ADN hybride, puis le RNaseHh dégradra l'ARN, l'AMNARE II et l'ADNc sont recensés pour synthétiser le deuxième brin complémentaire ADN sous l'action de la transcriptase inverse. Sous l'action de T7RNA. La polymérase, l'ADN à double échouement peut être démarré par sa séquence promoteur pour transcrire d'ARN. L'ARN peut être transcrit inverse dans l'ADN sous l'action de la transcriptase inverse, entrez la phase de circulation et amplifie un grand nombre de modèles.

b. Amplification médiée par la transcription

Le principe technique de TMA est fondamentalement le même que celui de NASBA. La légère différence est que TMA utilise la transcriptase inverse MMLV et T7RNA polymérase. La transcriptase inverse MMLV a à la fois une activité de transcriptase inverse et une activité RNase H.La réaction a été réalisée à 41,5 ° C et la gabarit d'ARN pourrait être amplifiée environ 109 fois en 1 heure.

c. Réaction de chaîne catalysée LIGASE (LCR)

La LCR est une technologie d'amplification de la sonde basée sur l'interconnexion des sondes oligonucléotides dépendantes de la molécule cible. Il s'agit d'une technologie d'amplification in vitro prometteuse développée après que PCR.Its Princile consiste à hybrider à la sonde d'ADN à deux oligonucléotides à deux segments avec la séquence cible. Lorsque la sonde d'ADN à deux segments s'estompe avec le gabarit sans mutation, si les deux sondes sont adjacentes et qu'il n'ya pas d'intervalle de nucléotide au milieu, ils peuvent être connectés sous l'action de LIGASE, et la nouvelle chaîne après la connexion peut être utilisée en tant que Modèle pour guider la connexion dans le cycle suivant pour produire de nouvelles chaînes de sous-chaînes.Si la mutation de base du nucléotide survient dans la section de connexion, la réaction de connexion ne peut pas se produire et la réaction d'amplification est terminée.

ré. Essai de réaction en chaîne de la polymérase (PCR)

Le principe de base de la technologie PCR est similaire au processus de réplication naturelle de l'ADN, et sa spécificité dépend des amorces oligonucléotidiques complémentaires aux deux extrémités de la séquence cible.PrR se compose de trois étapes de réaction de base: extension de recuit de la dénaturation.

Denaturation de l'ADN de modèle: Une fois que l'ADN de gabarit est chauffé à environ 93 pendant un certain temps, le double brin d'ADN de gabarit ou l'ADN de double brin formé par une amplification PCR est dissocié pour former un seul brin, de sorte qu'il puisse être combiné avec des amorces pour préparer le prochain cycle de réaction.

Recellage (Refolding) de l'ADN de modèle et de l'apprêt: Une fois l'ADN de gabarit chauffé et dénaturé dans un seul brin, la température tombe à environ 55 ° C et l'amorce est associée à la séquence complémentaire du brin unique de l'ADN de gabarit.

③ Extension d'amorce: sous l'action de TaqDna polymérase, le conjugué d'amorce de modèle d'ADN utilise DNTP comme matière première réactionnelle et séquence cible en tant que modèle pour synthétiser une nouvelle chaîne de réplication semi-conservée complémentaire à la chaîne d'ADN de modèle en fonction du principe de la jumelage de la base et des semi conservés réplication. Répétez les trois procédés d'extension de recuit de dénaturation cyclique pour obtenir plus de \"chaînes de réplication semi-conservées \", et cette nouvelle chaîne peut devenir le modèle du cycle suivant.Il prend 2-4 minutes et 2-3 heures pour amplifier le gène cible Pour être élargi des millions de fois. Pour détecter l'ARN du VIH, nous devons transcrire d'ARN dans l'ADNc par réaction de transcription inverse, puis une amplification PCR avec l'ADNc en tant que modèle. Cette réaction s'appelle RT-PCR.