ALAT ANTIGEN RAPID: Connaissance de base de la détection d'acide nucléique - Partie 2

ALAT ANTIGEN RAPID: connaître la détection d'acide nucléique

PCR quantitatif de fluorescence en temps réel

La technologie PCR quantitative de fluorescence en temps réel fait référence au procédé d'ajout de groupes fluorescents au système de réaction PCR, à l'aide de signaux fluorescents pour surveiller le processus de PCR en temps réel, et finalement analyser quantitativement le modèle inconnu à travers la courbe standard.

Le principe de cette technologie consiste à marquer la sonde avec groupe fluorescent, marquez le groupe fluorescent r à l'extrémité 5 'et marquer le groupe de trempe Qà l'extrémité 3 '. Lorsqu'il n'y a pas d'amplification de PCR, le groupe fluorescent est désactivé et n'émet pas de fluorescence due à la distance spatiale étroite entre le groupe fluorescent et le groupe de trempe; lorsque la PCR est amplifiée, l'amorce et la sonde spécifique étiquetée fluorescente sont combinées sur le modèle en même temps. La position de liaison entre la sonde marquée fluorescente et le gabarit est située entre les amorces amont et en aval. La sonde fluorescente est hydrolysée en utilisant l'activité d'exonucléase de 5 '3' de TAQ Enzyme, et le groupe fluorescent est libéré. Parce qu'il est séparé du groupe de trempe dans l'espace, il émet une fluorescence. La fluorescence émise peut être détectée par la sonde de fluorescence, amplifiée et détectée en même temps, de manière à réaliser la détection de \"en temps réel \".Cette technologie non ne réaliste que le saut de PCR de semi quantitative à quantitative, mais présente également les caractéristiques de la spécificité forte, du degré élevé d'automatisation et de résoudre efficacement le problème de la pollution de la PCR par rapport à la PCR conventionnelle.

Détection de l'ADN brin ramifié - BDNA

L'ADNA est une méthode de détection quantitative de l'ARN de type VIH de type 1 dans le plasma.dna désigne un fragment d'ADN synthétique avec des chaînes latérales. Chaque chaîne latérale peut être étiquetée avec un marqueur excité. L'ARN du VIH est libéré des particules de virus par centrifugation, puis capturées dans les micropores avec une sonde de capture

Spécifiquement se lie à une autre partie d'ARN viral et se lie également à une sonde pré-amplifiée.Le sinon est ensuite hybridée avec la sonde d'amplification, la sonde BDNA.Les deux ensembles de sondes cibles se lient spécifiquement à différentes régions du gène Pol de complexes viraux d'ARN.Hivrna oligonucléotide sont formés dans des micropores.Le signal de chimiluminescence peut être amplifié après une incubation avec un substrat de chimiiluminescence.Il est quantifié par intensité lumineuse, qui est proportionnelle à la teneur en hivrna dans l'échantillon.BDNA n'a aucune contamination croisée d'amplicons, ce qui est un grand progrès. Par rapport à la PCR.BDNA contient des dizaines de sondes couvrant le génome entier, ce qui peut facilement détecter certaines variantes du VIH, mais la sensibilité n'est pas aussi sensible que PCR. L'amélioration de la sensibilité de l'BDNA est une difficulté majeure.

Étapes de détection

Le processus de détection de la technologie de détection qualitative du VIH nucléique est divisé en extraction d'acide nucléique, synthèse de la transcription inverse de l'ADNc, une réaction d'amplification PCR, une analyse qualitative des produits d'amplification, un jugement des résultats et un rapport d'achèvement.